PCD-007 光化學柱(zhu)后衍生器(qi)
——提高(gao)黃曲(qu)霉毒素檢測靈(ling)敏(min)度(du)和重(zhong)復性的利器(qi)
成都摩爾(er)科學(xue)儀器有限公司
目錄
1 黃曲霉毒(du)素的危害 ........................................................................................................................ 1
2 黃曲(qu)霉毒(du)素的檢(jian)測方法 ................................................................................................................ 1
3 黃(huang)曲霉毒素檢測所需(xu)試(shi)劑(ji)及耗材(cai) ............................................................................................... 2
4 艾力析實驗科技有(you)限公司研(yan)制的光(guang)化(hua)學柱后(hou)衍生器 ................................................................ 3
4.1 儀器介紹 ........................................................................................................................... 3
4.2 產品特(te)點 ........................................................................................................................... 4
4.3 產品參(can)數 ........................................................................................................................... 4
4.4 安裝(zhuang)使用 ........................................................................................................................... 4
4.5 常見(jian)故障(zhang)及(ji)簡易排除方(fang)法(fa) ................................................................................................ 4
4.6 注意事項及日常(chang)維(wei)護 ....................................................................................................... 5
4.7 黃曲(qu)霉毒素檢測的解決方案 ............................................................................................ 5
4.7.1 營(ying)養米(mi)粉類嬰幼兒輔食 ........................................................................................ 5
4.7.2 乳制品 ................................................................................................................... 7
4.7.3 糧油 ........................................................................................................................ 9
4.7.4 花生(sheng)及其制品(pin) ..................................................................................................... 11
4.7.5 飼料 ..................................................................................................................... 13
4.7.6 中藥材(cai) ................................................................................................................. 15
4.8 磺胺類藥物的檢測 .......................................................................................................... 17
4.9 其他應(ying)用 ......................................................................................................................... 18
1 黃曲霉毒(du)素的危害
黃曲(qu)霉(mei)毒(du)(du)素是(shi)一(yi)組化學結(jie)構類(lei)似(si)的(de)(de)二呋喃香豆素的(de)(de)衍生(sheng)(sheng)化合(he)物(wu)(wu)，可(ke)以(yi)由曲(qu)霉(mei)菌(jun)黃曲(qu)霉(mei)、寄生(sheng)(sheng)曲(qu)霉(mei)、集(ji)峰曲(qu)霉(mei)和偽滯(zhi)曲(qu)霉(mei)產生(sheng)(sheng)。黃曲(qu)霉(mei)毒(du)(du)素常常存在于發生(sheng)(sheng)霉(mei)變的(de)(de)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)藥材(cai)、谷(gu)物(wu)(wu)、農(nong)作物(wu)(wu)、堅果(guo)、奶(nai)制品以(yi)及動(dong)物(wu)(wu)飼(si)料(liao)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)等(deng)相(xiang)關的(de)(de)產品中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)。其中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong) B1、B2、G1、G2易(yi)污染多種(zhong)農(nong)作物(wu)(wu)、食品、飼(si)料(liao)及中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)藥材(cai)。黃曲(qu)霉(mei)毒(du)(du)素被世界衛生(sheng)(sheng)組織（WHO）的(de)(de)癌(ai)(ai)癥研究結(jie)構（IARC）劃定為 I 類(lei)致癌(ai)(ai)物(wu)(wu)，是(shi)一(yi)種(zhong)毒(du)(du)性(xing)(xing)(xing)極(ji)強(qiang)的(de)(de)物(wu)(wu)質，其毒(du)(du)性(xing)(xing)(xing)是(shi)氰化鉀的(de)(de) 10 倍，其中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)以(yi) B1毒(du)(du)性(xing)(xing)(xing)zui大。當(dang)(dang)人攝入(ru)(ru)量(liang)大時，可(ke)發生(sheng)(sheng)急(ji)性(xing)(xing)(xing)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)毒(du)(du)，出現(xian)急(ji)性(xing)(xing)(xing)肝炎、出血(xue)性(xing)(xing)(xing)壞死、肝細胞(bao)脂肪變性(xing)(xing)(xing)和膽管(guan)增生(sheng)(sheng)。當(dang)(dang)微量(liang)持續攝入(ru)(ru)，可(ke)造成慢(man)性(xing)(xing)(xing)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)毒(du)(du)，生(sheng)(sheng)長(chang)障(zhang)礙(ai)，引(yin)起纖維(wei)性(xing)(xing)(xing)病(bing)變，致使纖維(wei)組織增生(sheng)(sheng)。
2 黃(huang)曲霉(mei)毒素的檢(jian)測方法
黃曲霉毒素是當前(qian)食(shi)品(pin)及藥品(pin)中污(wu)染zui嚴(yan)重(zhong)的(de)真(zhen)菌毒素之一。因此，GB/T 2761-2011嚴(yan)格規定了各類食(shi)品(pin)中的(de)限(xian)(xian)量(liang)，zui低(di)限(xian)(xian)量(liang)值是 0.5μg/kg,所建立的(de)檢測(ce)方法必須達到 0.05μg/kg 的(de)zui低(di)定量(liang)限(xian)(xian)才能滿足(zu)限(xian)(xian)量(liang)的(de)檢測(ce)。同時在 2015 版藥典七(qi)大變(bian)化(hua)之一安全性控(kong)制項
目大幅(fu)提升中(zhong)，明確(que)規定并強制推行中(zhong)藥(yao)(yao)材(cai)中(zhong)黃(huang)(huang)(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)(mei)(mei)毒(du)素(su)(su)(su)的(de)限(xian)量檢(jian)測(ce)。對(dui)(dui)《中(zhong)國藥(yao)(yao)典》收載的(de)柏子(zi)仁、蓮子(zi)、使君子(zi)、檳榔、麥(mai)芽、肉豆蔻(kou)、決明子(zi)、遠(yuan)志、薏苡(yi)仁、大棗、地龍、蜈蚣(gong)、水(shui)蛭、全(quan)蝎等(deng) 14 味(wei)藥(yao)(yao)材(cai)及其飲品(pin)品(pin)種項(xiang)下(xia)增加“黃(huang)(huang)(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)(mei)(mei)毒(du)素(su)(su)(su)”檢(jian)查(cha)項(xiang)目，限(xian)度為(wei)“黃(huang)(huang)(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)(mei)(mei)毒(du)素(su)(su)(su) B1不得超過(guo) 5μg/kg;黃(huang)(huang)(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)(mei)(mei)毒(du)素(su)(su)(su) B2、黃(huang)(huang)(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)(mei)(mei)毒(du)素(su)(su)(su) G1、黃(huang)(huang)(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)(mei)(mei)毒(du)素(su)(su)(su) G2總(zong)量不得超過(guo)10μg/kg”。目前(qian)(qian)，對(dui)(dui)食(shi)品(pin)和(he)中(zhong)藥(yao)(yao)材(cai)中(zhong)黃(huang)(huang)(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)(mei)(mei)毒(du)素(su)(su)(su)的(de)檢(jian)測(ce)方法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)主要有(you)：薄(bo)層(ceng)色(se)譜(pu)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)（TLC），酶聯免(mian)疫(yi)吸附法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)（ELISA）,親(qin)和(he)層(ceng)析法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)（AFTB1）、免(mian)疫(yi)親(qin)和(he)-液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)（HPLC 法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)）及液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)-質譜(pu)聯用(yong)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)（LC-MS）。其中(zhong)將免(mian)疫(yi)親(qin)和(he)柱(zhu)(zhu)(zhu)與高效液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)結合應用(yong)，由于其前(qian)(qian)處理(li)方法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)簡單、儀器使用(yong)成本(ben)相(xiang)對(dui)(dui)較低、可異構體分離(li)、分離(li)靈(ling)敏(min)度高、穩定性好等(deng)******性，近年(nian)來已經得到廣泛的(de)應用(yong)。由于黃(huang)(huang)(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)(mei)(mei)毒(du)素(su)(su)(su) B1、G1采用(yong)液(ye)相(xiang)色(se)譜(pu)熒光(guang)檢(jian)測(ce)直接檢(jian)測(ce)時易發生猝滅而導致靈(ling)敏(min)度較低，因此需要對(dui)(dui)其進行衍(yan)(yan)生后才能達到痕量檢(jian)測(ce)的(de)要求(qiu)。現行的(de)黃(huang)(huang)(huang)曲(qu)(qu)霉(mei)(mei)(mei)素(su)(su)(su)檢(jian)測(ce)采用(yong)的(de)衍(yan)(yan)生方法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)主要分為(wei)柱(zhu)(zhu)(zhu)前(qian)(qian)衍(yan)(yan)生（TFA 柱(zhu)(zhu)(zhu)前(qian)(qian)衍(yan)(yan)生）和(he)柱(zhu)(zhu)(zhu)后衍(yan)(yan)生法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)（光(guang)化學柱(zhu)(zhu)(zhu)后衍(yan)(yan)生、溴和(he)碘(dian)柱(zhu)(zhu)(zhu)后衍(yan)(yan)生）。采用(yong) TFA 柱(zhu)(zhu)(zhu)前(qian)(qian)衍(yan)(yan)生法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)，雖然檢(jian)測(ce)靈(ling)敏(min)度高，但需要用(yong)到有(you)毒(du)有(you)害試劑（三氟(fu)乙酸、正己烷），且操作(zuo)較其他幾種方法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)繁瑣；溴和(he)碘(dian)柱(zhu)(zhu)(zhu)后衍(yan)(yan)生法(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)(fa)，在
樣(yang)(yang)品預(yu)處理(li)上(shang)相對(dui)較簡單，但檢測(ce)(ce)時(shi)(shi)需配備傳統的柱(zhu)后(hou)(hou)衍(yan)(yan)(yan)生(sheng)(sheng)裝置，同時(shi)(shi)需要手動品配制衍(yan)(yan)(yan)生(sheng)(sheng)液，而不同人手動配制的衍(yan)(yan)(yan)生(sheng)(sheng)液的濃度會(hui)存在差異，從(cong)而導致待測(ce)(ce)物質保留時(shi)(shi)間穩定性(xing)較差。而光(guang)(guang)化(hua)學(xue)(xue)柱(zhu)后(hou)(hou)衍(yan)(yan)(yan)生(sheng)(sheng)法(fa)在操作上(shang)相對(dui)簡單，樣(yang)(yang)品經過處理(li)后(hou)(hou)可直接進樣(yang)(yang)分(fen)析，減少了有機試劑的接觸；且有效提(ti)高黃曲(qu)霉毒素檢驗靈(ling)敏度和重(zhong)復(fu)性(xing);此外光(guang)(guang)化(hua)學(xue)(xue)柱(zhu)后(hou)(hou)衍(yan)(yan)(yan)生(sheng)(sheng)器較傳統的柱(zhu)后(hou)(hou)衍(yan)(yan)(yan)生(sheng)(sheng)裝置成本低，且檢測(ce)(ce)靈(ling)敏度較溴(xiu)和碘柱(zhu)后(hou)(hou)衍(yan)(yan)(yan)生(sheng)(sheng)法(fa)理(li)想。
4.2 產(chan)品特點(dian)
（1）無需使用化學(xue)物(wu)質（節約成本(ben)的同時，也避免操作人員接觸有毒化學(xue)物(wu)質）；
（2）較傳(chuan)統(tong)柱(zhu)后(hou)衍(yan)生裝(zhuang)置(zhi)（化(hua)學衍(yan)生泵(beng)、混合器(qi)、溫控(kong)裝(zhuang)置(zhi)）成本低；
（3）直(zhi)接連接于色譜(pu)柱與熒光檢(jian)測器(qi)之間，安裝操作(zuo)簡單；
（4）外觀設(she)計精巧細致，節省實驗室空間；
（5）******采用進口配件，******了產品(pin)的使用性能；
（6）采用(yong) PHILIP 進口紫(zi)外燈光源(yuan)，使(shi)用(yong)壽(shou)命長達 8000h；
（7）采用專利(li)的(de)支架和管(guan)線纏繞方式，******了反應效率；
（8）可與(yu)國內外(wai)各種品牌及型號的熒(ying)光檢測器聯用；
（9）無腐蝕(shi)性(xing)酸流經(jing)毛細管，增(zeng)加 HPLC 儀器(qi)的壽命；
（10）可持續(xu)工作數千小時(shi)，用后(hou)無(wu)需沖洗步(bu)驟(zou)；
（11）黃曲霉毒(du)素 B1、B2、G1、G2 的zui低檢測限均小(xiao)于 0.5 ppb；
（12）符合 AOAC 2005.08, AOAC 2008.02,AOCS Aa 11-05 ，中國臺灣標準(zhun)（食
字 0981800370 號公告）和歐盟藥典 2.8.18 標準分(fen)析方法要(yao)求；
（13）符合中(zhong)國國家標準和進出口檢驗(yan)標準及 2015 版中(zhong)國藥典要求（增訂光化學衍生法）；
4.3 產品參(can)數
設備(bei)尺寸(cun)：411mm×53mm×68mm（長×寬×高）
凈(jing)重(zhong)： kg
毛重(zhong)： kg
管(guan)線(xian)有效(xiao)長(chang)度：25m
出入端(duan)管線長度：≤500mm
紫外燈壽命：≥4000
工作電源：220V、50Hz
工(gong)作功(gong)率(lv)：11W
環境溫度(du)：0~45℃
環境(jing)要求(qiu)：嚴禁浸(jin)水、淋水，內含易碎物質避免(mian)沖擊及(ji)跌(die)落。
4.4 安裝(zhuang)使用
（1）將衍生器上的聚四氟乙烯管，用配套規格的的 PEEK 接頭，一(yi)端連接色譜柱，一(yi)段連接檢測器，無連接方(fang)向(xiang)要求
（2） 啟(qi)動 HPLC 恒流(liu)輸液(ye)泵并且流(liu)量壓力均(jun)穩定后(hou)，檢測各連接器件(jian)有(you)無漏液(ye)情況(kuang)，確定無誤通電(dian)(dian)并打開電(dian)(dian)源開關（正面綠色自鎖(suo)開關），系統進入紫(zi)外(wai)燈(deng)管預熱(re)狀態(tai)。此時紫(zi)外(wai)燈(deng)點(dian)亮(liang)并預熱(re)，大約 10min 光線穩定后(hou)即可正常衍生(sheng)反應。
4.5 常見故障及簡(jian)易排除方法
（1）儀器安裝完畢(bi)后，務必開啟高(gao)壓(ya)泵經過 1~2min 恒壓(ya)運行，用濾紙檢(jian)查儀器前后連接件確定無漏(lou)液后再(zai)開啟電(dian)源使(shi)用，漏(lou)液應及時清(qing)潔(jie)，避(bi)免流動相溶劑對設備的腐(fu)蝕。避(bi)免環境影響，縮短平衡時間。
（2）請匆自行拆(chai)開儀(yi)器(qi)或任(ren)意改變(bian)溫(wen)度控制器(qi)的內部設置，普通用戶對(dui)于復雜的系統參數設置不熟悉時盡量使用出廠默(mo)認值(zhi)或儀(yi)器(qi)自動設定值(zhi)，如有問題(ti)請及(ji)時與本公司聯系。
（3）儀器通電衍生后，出峰(feng)變小(xiao)或異(yi)常(chang)峰(feng)；燈管光照不(bu)足(zu)或燒壞(huai)，使用備用系統或返廠(chang)更換維修；上述問題您(nin)無(wu)法解決時(shi)，請與經銷(xiao)商或廠(chang)家聯(lian)系。
4.6 注意(yi)事項及(ji)日常維護
（1）使用前請檢查電源插座是否良好(hao)接(jie)地，若沒有請用線接(jie)好(hao)背面保(bao)(bao)護地線！柱(zhu)大量漏液(ye)時可能(neng)對電氣有腐(fu)蝕作用，長期腐(fu)蝕可能(neng)引(yin)起漏電，造成事故損失(shi)，因此(ci)請確保(bao)(bao)儀器良好(hao)接(jie)地。
（2）應保持柱箱(xiang)部(bu)件的(de)清(qing)潔(jie)，不用時請切(qie)斷電(dian)源。
（3）嚴禁非(fei)維(wei)修人員拆解儀(yi)器，內有紫外光線，請勿直視漏光部(bu)位。
（4）燈管為專(zhuan)用燈管，更換時請務必確認切(qie)斷(duan)電源。
（5）儀器(qi)自(zi)然散熱(re)，工作(zuo)中(zhong)請******通風，勿(wu)覆蓋影(ying)響散熱(re)。
4.7 黃曲(qu)霉毒素(su)檢測的解決方案
4.7.1 營養米粉(fen)類嬰幼(you)兒輔食
嬰(ying)(ying)幼(you)(you)(you)兒(er)(er)(er)正直身體發育時(shi)期，應(ying)該營養(yang)均(jun)衡搭配(pei)，提(ti)倡(chang)給嬰(ying)(ying)幼(you)(you)(you)兒(er)(er)(er)吃大自然提(ti)供給人類的(de)各(ge)種食物。而(er)在這些食物中(zhong)，嬰(ying)(ying)幼(you)(you)(you)兒(er)(er)(er)米(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)粉(fen)(fen)（稱“嬰(ying)(ying)幼(you)(you)(you)兒(er)(er)(er)配(pei)方谷粉(fen)(fen)”、“營養(yang)米(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)粉(fen)(fen)”或“嬰(ying)(ying)幼(you)(you)(you)兒(er)(er)(er)米(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)糊”），是母乳或嬰(ying)(ying)兒(er)(er)(er)配(pei)方食品(pin)不(bu)能滿足嬰(ying)(ying)兒(er)(er)(er)營養(yang)需要以及嬰(ying)(ying)兒(er)(er)(er)斷奶期間時(shi)，為(wei)補(bu)充嬰(ying)(ying)幼(you)(you)(you)兒(er)(er)(er)營養(yang)的(de)非常重要的(de)輔助食品(pin)。由于營養(yang)米(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)粉(fen)(fen)以小米(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)、大米(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)為(wei)主要原料，而(er)小米(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)和大米(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)若儲藏(zang)不(bu)當(dang)，******容(rong)易受到黃曲(qu)霉毒(du)素的(de)污染(ran)。據不(bu)******統計，2015 年以來，國家食藥監總局共公布了 64 批(pi)次(ci)存(cun)在食品(pin)安全(quan)風(feng)險的(de)嬰(ying)(ying)幼(you)(you)(you)兒(er)(er)(er)輔食，其中(zhong)黃曲(qu)霉毒(du)素等污染(ran)物超(chao)標(biao)達 15
批次。因此，企業(ye)和國家(jia)質檢部(bu)門有必(bi)要加強對嬰(ying)幼(you)兒(er)輔(fu)食中霉菌(jun)毒素的檢測(ce)與監管，保障嬰(ying)幼(you)兒(er)食品的安全。
針對嬰幼兒營養米粉(fen)中黃(huang)曲霉毒素(su)(su) B1 的(de)檢測，青島艾力析(xi)實驗科技有限(xian)公司(si)為(wei)您(nin)提供了(le)整套解(jie)決方案。滿足(zu)我國嬰幼兒食品中黃(huang)曲霉毒素(su)(su) B1(GB2761-2011)的(de)限(xian)量標準 0.5μg／kg 的(de)要求。
（1）色譜條(tiao)件
色譜柱：Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)
流動相：甲醇—水(shui) （55/45，v/v）
柱溫(wen)：25℃
流速：0.8mL/min
進樣(yang)量：20μL
檢(jian)測器：熒(ying)光檢(jian)測器
檢測波(bo)長：EX（激(ji)發波(bo)長）=360nm,EM（發射波(bo)長）=420nm
進(jin)樣前2min開(kai)啟(qi)光化學衍(yan)生池電源
光化學(xue)衍生化系(xi)統(tong)：光化學(xue)衍生器（連接于色譜柱(zhu)后，然后通向熒(ying)光檢測器）
（2）樣(yang)品(pin)處理
? 提取(qu)
? ******稱取 25.000g 樣品于 500mL 的具塞玻璃容量(liang)瓶中(zhong)，加入(ru) 125mL 甲(jia)醇-水(體(ti)積比為 70∶30)溶液；
? 在高速(su)勻質機上勻質 2～3min；
? 取(qu) 30mL 左右勻質后的樣液以 4000r／min 離心 5min；
? 取上層清液 10mL 加入(ru) 30mL 水稀釋(shi)，搖勻后(hou)過(guo)玻璃纖維濾(lv)紙過(guo)濾(lv)，濾(lv)液備(bei)用。
? SPE 柱凈化
? 回溫解凍(dong)：提前(qian)辦(ban)小(xiao)時將黃曲霉毒素免疫親和柱從(cong)冰箱拿出常溫解凍(dong)；
? 安裝(zhuang)(zhuang)：將(jiang)回(hui)溫解凍(dong)后的(de)免(mian)疫親和(he)柱安裝(zhuang)(zhuang)到固相萃取(qu)裝(zhuang)(zhuang)置(zhi)上(shang)；
? 上(shang)樣：將提取(qu)的樣品(pin)濾液(ye)全(quan)部轉移到 10mL 玻璃注射器(qi)中，調(diao)節固相萃取(qu)裝置上(shang)的壓力(li)控(kong)制(zhi)(zhi)閥，控(kong)制(zhi)(zhi)樣品(pin)溶液(ye)以 1 滴/s 的速(su)度通過免疫(yi)親和(he)柱，直(zhi)至(zhi) 2~3mL 空氣通過柱體，棄去流出液(ye)；
? 淋洗(xi)：向(xiang)玻璃注射器內加入(ru)(ru) 10mL 水淋洗(xi)免疫(yi)親和柱(zhu)，流速位 1 滴(di)/s~2 滴(di)/s，淋洗(xi)液兩次。直至(zhi)空氣進入(ru)(ru)免疫(yi)親和柱(zhu)后有 2~3mL 空氣通過柱(zhu)體(ti)，棄(qi)去全部的流出液，抽干小柱(zhu)；
? 洗(xi)脫(tuo)：******加入2.0mL流(liu)動(dong)相至注(zhu)射器(qi)內(nei)，以約為(wei)1滴/s的流(liu)速(su)將免疫親和(he)柱(zhu)上(shang)的B1洗(xi)脫(tuo)下(xia)來,收集全部(bu)的洗(xi)脫(tuo)液于干凈的玻璃(li)離心(xin)管中,于渦旋(xuan)混(hun)合器(qi)上(shang)振蕩(dang)1min，過0.45μm濾膜(mo)，供液相色譜測定(ding)。
（3）樣品測定
HPLC 直(zhi)接進(jin)樣(yang)，經 C18 色譜(pu)柱(zhu)、光化(hua)學柱(zhu)后衍生化(hua)后熒光檢(jian)測(ce)器直(zhi)接記錄并(bing)計算出黃(huang)曲霉(mei)(mei)毒素 B1 的濃度；圖(tu) 3 為嬰幼兒營(ying)養米粉(fen)中黃(huang)曲霉(mei)(mei)毒素 B1 樣(yang)品(pin)檢(jian)測(ce)及加標樣(yang)品(pin)檢(jian)測(ce)疊加譜(pu)圖(tu)。
（1）色譜條(tiao)件
色(se)譜柱：Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)
流動相：甲醇—乙腈—水 （25/20/55，v/v）
柱溫：30℃
流速：1.0 mL/min
進樣量：20μL
檢(jian)測(ce)器(qi)：熒(ying)光檢(jian)測(ce)器(qi)
檢測波(bo)長：EX（激發波(bo)長）=355nm,EM（發射波(bo)長）=430nm
進樣前2min開(kai)啟光化學(xue)衍生池電(dian)源(yuan)
光化學衍生化系統：光化學衍生器(qi)（連(lian)接于(yu)色譜(pu)柱后，然后通向熒光檢測器(qi)）
（2）樣品處理
? 提取
? ******稱(cheng)取(qu) 2.0000g 奶粉樣品，置于(yu) 50mL 的(de)離心管中(zhong)。將 20mL 已預熱到 50℃的(de)水(shui)加(jia)入到奶粉中(zhong)，邊加(jia)邊振(zhen)搖至奶粉******溶解；
? 在渦旋(xuan)混合(he)器上(shang)振蕩(dang) 2min 混合(he)均勻(yun)；
? 將奶粉(fen)乳濁(zhuo)液冷(leng)卻(que)至室溫后，于 10000r/min、在-5℃下離心 10min；
? 取 30mL 左右勻質后(hou)的樣液(ye)以 4000r／min 離心 5min；
? 將樣品溶液(ye)用玻璃纖維濾紙過濾，濾液(ye)備用。
? SPE 柱凈化
? 回溫解凍：提前辦(ban)小時將黃(huang)曲霉毒素免疫親和柱(zhu)從(cong)冰箱(xiang)拿出(chu)常溫解凍；
? 安裝：將回溫解凍(dong)后的免疫(yi)親和柱安裝到固相萃取裝置(zhi)上(shang)；
? 上(shang)樣(yang)：將提取的(de)(de)樣(yang)品濾液全部轉(zhuan)移到 10mL 玻(bo)璃注射器中，調節固相萃(cui)取裝置(zhi)上(shang)的(de)(de)壓力控(kong)制閥(fa)，控(kong)制樣(yang)品溶液以 1 滴/s 的(de)(de)速(su)度通(tong)過免(mian)疫親(qin)和柱(zhu)，直至 2~3mL 空氣通(tong)過柱(zhu)體，棄去流出液；
? 淋(lin)(lin)洗：向玻璃注射(she)器內加入 10mL 水(shui)淋(lin)(lin)洗免(mian)疫(yi)親和柱(zhu)(zhu)(zhu)，流速(su)位 1 滴(di)/s~2 滴(di)/s，淋(lin)(lin)洗液兩(liang)次(ci)。直至空氣(qi)進入免(mian)疫(yi)親和柱(zhu)(zhu)(zhu)后有(you) 2~3mL 空氣(qi)通過(guo)柱(zhu)(zhu)(zhu)體，棄去全部的流出液，抽(chou)干(gan)小柱(zhu)(zhu)(zhu)；
? 洗脫(tuo)：******加入1.0mL流(liu)(liu)動相(xiang)至注射器內，以約為1滴/s的流(liu)(liu)速將免疫(yi)親和柱上的B1洗脫(tuo)下來,收(shou)集全部的洗脫(tuo)液于(yu)干凈的玻璃(li)離(li)心管中,用(yong)水(shui)定(ding)(ding)容到(dao)2mL。于(yu)渦旋混合(he)器上振蕩1min，過0.45μm濾膜，供液相(xiang)色譜測定(ding)(ding)。
（3）樣品測定(ding)
HPLC 直(zhi)接進樣，經 C18 色(se)(se)譜(pu)柱、光化學柱后衍生化后熒(ying)光檢測(ce)器直(zhi)接記錄并計算出黃(huang)曲霉(mei)毒(du)素 B1、B2、G1、G2、M1 和 M2 的濃度；圖 4 為 6 種黃(huang)曲霉(mei)毒(du)素同(tong)時檢測(ce)的色(se)(se)譜(pu)圖。
（1）色(se)譜條件
色(se)譜柱： Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)
流動(dong)相：甲醇(chun)—水 （50/50，v/v）
柱溫：30℃
流速(su)：1.0 mL/min
進樣(yang)量(liang)：20μL
檢(jian)測器(qi)：熒光(guang)檢(jian)測器(qi)
檢測波長：EX（激發波長）=360nm,EM（發射波長）=440nm
進樣(yang)前2min開啟(qi)光化學衍(yan)生池電源
光化(hua)學衍生(sheng)化(hua)系(xi)統：光化(hua)學衍生(sheng)器(qi)（連接于(yu)色譜柱后(hou)，然后(hou)通向熒光檢測器(qi)）
（2）樣品處(chu)理
? 提(ti)取
? ******稱(cheng)取 25.000g 糧、油樣品于 500mL 錐形瓶中，加入(ru) 5g 氯化鈉、加入(ru) 125mL甲醇水(體積(ji)比(bi)為(wei) 70∶30)；
? 在高速勻(yun)質機上勻(yun) 20mL 水稀(xi)釋，搖(yao)勻(yun)后過玻璃纖維濾(lv)紙過濾(lv)，濾(lv)液(ye)備用。
? SPE 柱凈(jing)化(hua)
? 回(hui)溫解凍：提前(qian)辦小時(shi)將黃曲霉毒素免疫親(qin)和柱從冰(bing)箱拿(na)出常溫解凍；
? 安裝：將回溫解凍后的免疫親和柱安裝到固相萃(cui)取裝置上(shang)；
? 上樣：將提(ti)取的樣品(pin)濾液(ye)全部轉移到 10mL 玻璃注射(she)器中，調節固相萃取裝置上的壓力(li)控制閥，控制樣品(pin)溶(rong)液(ye)以 1 滴/s 的速度通(tong)過免疫親和(he)柱(zhu)，直至 2~3mL 空氣通(tong)過柱(zhu)體，棄去流(liu)出液(ye)；
? 淋洗：向(xiang)玻璃(li)注射器內加入 10mL 水淋洗免疫(yi)親(qin)和(he)柱，流速位 1 滴/s~2 滴/s，淋洗液兩次。直至(zhi)空氣(qi)進入免疫(yi)親(qin)和(he)柱后有 2~3mL 空氣(qi)通過柱體，棄去全部的流出液，抽干小(xiao)柱；
? 洗(xi)脫(tuo)：******加(jia)入1.0mL甲醇(chun)至(zhi)注射器內(nei)，以約為1滴/s的(de)流速將免(mian)疫親和柱上的(de)B1洗(xi)脫(tuo)下來,收(shou)集全部的(de)洗(xi)脫(tuo)液于干凈的(de)玻璃離(li)心管中,加(jia)入1.0mL純(chun)水于洗(xi)脫(tuo)液中，于渦(wo)旋混合器上振(zhen)蕩1min，過(guo)0.45μm濾膜，供液相色譜測定。
（3）樣品(pin)測(ce)定
HPLC 直(zhi)(zhi)接進樣(yang)，經 C18 色譜柱、光化學柱后衍生化后熒光檢測(ce)器直(zhi)(zhi)接記錄并(bing)計算出黃(huang)曲霉毒素(su) B1、B2、G1、G2的濃度(du)；圖 4 為各(ge)樣(yang)品檢測(ce)色譜圖。
（1）色譜條(tiao)件
色(se)譜(pu)柱：Sepax Sapphire C18 5um 4.6*300mm(PN:320185-4630)
流動相(xiang)：甲醇(chun)—水 （55/45，v/v）
柱溫：25℃
流(liu)速：0.8mL/min
進樣(yang)量(liang)：50μL
檢測(ce)器(qi)：熒(ying)光檢測(ce)器(qi)
檢測(ce)波(bo)長：EX（激發(fa)波(bo)長）=360nm,EM（發(fa)射波(bo)長）=420nm
進樣前(qian)2min開(kai)啟光化(hua)學(xue)衍生池(chi)電源(yuan)
光化學衍(yan)生化系(xi)統：光化學衍(yan)生器(qi)（連(lian)接于色譜柱(zhu)后，然后通向(xiang)熒(ying)光檢測器(qi)）
（2）樣品處理
? 提取(qu)
? ******稱取 25.000g 粉(fen)碎樣品(pin)于 500mL 的錐形瓶中，加入 125mL 甲(jia)醇-水(體積比
為(wei) 70∶30)溶(rong)液(ye)；
? 在(zai)高(gao)速勻質(zhi)機上勻質(zhi) 2～3min；
? 取 30mL 左右勻質后(hou)的(de)樣液以 4000r／min 離心 10min；
? 用槽(cao)紋濾紙過(guo)濾試樣溶液于 50mL 量筒中(zhong)；
? 收集濾液 15mL，加入 30mL 二次(ci)去離子(zi)水，混勻，將稀釋后(hou)的濾液用玻璃纖維濾紙再次(ci)過(guo)濾。
? SPE 柱凈(jing)化
? 回溫解凍(dong)：提前辦小時將(jiang)黃曲霉毒素免疫(yi)親和柱從冰箱拿出常溫解凍(dong)；
? 安裝(zhuang)(zhuang)：將(jiang)回溫解凍后(hou)的免疫(yi)親和柱(zhu)安裝(zhuang)(zhuang)到固相萃(cui)取(qu)裝(zhuang)(zhuang)置上；
? 上(shang)樣：將提取的樣品濾(lv)液 15mL 轉(zhuan)移到(dao)玻璃注射(she)器中，調節固相萃取裝置上(shang)的壓力控制閥，控制樣品溶液以 1 滴/s 的速度通(tong)過(guo)免疫親和柱(zhu)，直至 2~3mL 空氣通(tong)過(guo)柱(zhu)體，棄(qi)去流出液；
? 淋(lin)洗(xi)：向玻璃注射器內加入 10mL 去離子水(shui)淋(lin)洗(xi)免疫(yi)親(qin)(qin)和柱(zhu)，流(liu)速位 1 滴/s~2滴/s，淋(lin)洗(xi)液(ye)兩次。直至空氣(qi)進入免疫(yi)親(qin)(qin)和柱(zhu)后有 2~3mL 空氣(qi)通過柱(zhu)體，棄去全部的流(liu)出液(ye)，抽(chou)干小柱(zhu)；
? 洗(xi)(xi)脫：加入(ru)1.0mL甲(jia)醇至注射器內，以(yi)約為1滴/s的(de)流速(su)將免疫親(qin)和柱上(shang)的(de)黃曲(qu)霉毒素B1、B2、G1、G2洗(xi)(xi)脫下來,收集全部的(de)洗(xi)(xi)脫液(ye)于干凈的(de)玻璃離心(xin)管中,并加入(ru)1mL去離子水，于渦旋混合器上(shang)振蕩1min，過(guo)0.45μm濾膜，供液(ye)相色譜測(ce)定。
（3）樣品測定(ding)
HPLC 直接進(jin)樣(yang)，經 C18 色譜(pu)柱、光(guang)化(hua)學(xue)柱后(hou)衍生化(hua)后(hou)熒光(guang)檢測器直接記錄并計算(suan)出黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2的(de)濃度；圖(tu) 6 為花生粉樣(yang)品添加(jia) 1.5μg/kg 水平的(de)色譜(pu)圖(tu)。
根據 GB/T 30955-2014 中飼(si)料中黃曲霉毒素的(de)檢測方(fang)法，青(qing)島艾力析實驗科技有限公司提供完整的(de)解決方(fang)案。
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